WWW.LIB.KNIGI-X.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Электронные материалы
 

«УДК [634.741:641.524.6].004.12 ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В ALOCASIA MACRORRHIZA Е.А. Антипова1, С.М. Юдина1, Л.Е. Тимофеева1, Е.А.Лейтес2* ...»

ХИМИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ. 2004. №3. С. 103–107.

УДК [634.741:641.524.6].004.12

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В ALOCASIA

MACRORRHIZA

Е.А. Антипова1, С.М. Юдина1, Л.Е. Тимофеева1, Е.А.Лейтес2*

Алтайский государственный медицинский университет, пр. Ленина, 40

Барнаул (Россия), e-mail:rector@medlink.ru

Алтайский государственный университет, пр. Ленина, 61, Барнаул, 656099

(Россия), e-mail: leites@chemwood.dcn-asu.ru Изучен состав биологически активных соединений, содержащихся в лекарственном растении Alocasia makrorrhiza. Установлено наличие алкалоидов, флавоноидов и кумаринов. Содержащийся в Alocasia makrorrhiza алкалоид близок по структуре к хинину и аймалину. Идентифицированы флавоноиды – гиперозид, ликурозид и кверцетин.

Введение Растения – ценный природный источник лекарственного сырья. Алоказия крупнокорневая (Alocasia makrorrhiza (L.) G. Don [1]) семейства ароидных – это многолетнее растение, достигающее 2–3 м высоты.

Распространено во влажных тропических лесах Азии. В мире существует более 70 видов многолетних клубневых растений рода алоказия. В России несколько разновидностей алоказии выращивают как декоративное растение.

Alocasia makrorrhiza (L.) – широко используемое средство в народной медицине при онкологических заболеваниях, туберкулезе, заболеваниях верхних дыхательных путей, как ранозаживляющее и противовоспалительное. С этой точки зрения важно, какие вещества, в том числе и биологически активные соединения, содержатся в данном лекарственном сырье. Известно, что флавоноиды, содержащиеся в растительном сырье, например дигидрокверцетин, могут проявлять себя как антиоксиданты [2], а некоторые алкалоиды, например винбластин и винкристин, обладают противоопухолевой активностью [3].



Состав растения практически не изучен. Имеющиеся публикации в основном относятся к условиям произрастания, фотосинтеза [4–14]. Из немногочисленных источников известно, что сок растения ядовит и что в алоказии содержатся углеводы, жиры, витамины, соединения ртути, цианиды [15–17].

Целью данной работы является обнаружение основных групп биологически активных веществ.

Экспериментальная часть и обсуждение результатов Для проведения исследований использовали надземную часть (листья и черешки) алоказии, выращенной в Барнауле, Павловске, Белокурихе. Сырье анализировали в свежем и сухом виде. Сухое сырье получали согласно правилам сбора и сушки лекарственных растений [18]. Лекарственное сырье во избежание разрушения лекарственных веществ и для удаления излишней влаги высушивали сразу после сбора наиболее распространенным методом – воздушной сушкой, основанной на свободном доступе воздуха к сырью, разложенному в затемненном месте.

Качественный химический анализ надземной части алоказии проводили на основные группы биологически активных веществ: алкалоиды, дубильные вещества, кумарины, сапонины, антрацены, флороглюцины, сердечные гликозиды.

* Автор, с которым следует вести переписку.

104 Е.А. АНТИПОВА, С.М. ЮДИНА, Л.Е. ТИМОФЕЕВА, Е.А.ЛЕЙТЕС Приготовление водных и водно-спиртовых экстрактов из измельченной надземной части алоказии для качественного определения биологически активных веществ проводили описанными ниже способами.

Алкалоиды. Навеску массой 2 г помещали в колбу на 100 мл, добавляли 50 мл 1% раствора HCl и нагревали на кипящей водяной бане в течение 30 мин.





Дубильные вещества. К навеске массой 1 г добавляли 100 мл дистиллированной воды, нагревали на водяной бане 30 мин.

Флавоноиды. К навеске массой 2 г добавляли 25 мл 96% этилового спирта, нагревали на водяной бане в колбе с обратным холодильником в течение 30 мин.

Кумарины. К навеске массой 2 г добавляли 10 мл 96% этилового спирта, нагревали на водяной бане 2–3 мин при температуре не выше 50 °С.

Сапонины. К навеске массой 1 г добавляли 10 мл дистиллированной воды, нагревали на водяной бане в течение 10 мин.

Флороглюцины. В колбу с притертой пробкой помещали навеску массой 1г, добавляли 10 мл 96% этилового спирта. Периодически встряхивали колбу в течение суток.

Сердечные гликозиды. К навеске массой 5 г добавляли 50 мл 80% этилового спирта, выдерживали сутки в колбе с притертой пробкой. Спирт отгоняли под вакуумом, водный остаток в делительной воронке подвергали воздействию четыреххлористого углерода 6 раз по 10 мл. Далее из водного остатка проводили экстракцию смесью хлороформ : пропанол-2 (3 : 1) 4 раза по 10 мл. К экстракту добавляли 2 г безводного Na2SO4.

После охлаждения полученные экстракты фильтровали через бумажный фильтр. С фильтратом проводили качественные реакции.

Обнаружение вышеперечисленных биологически активных веществ в извлечениях из надземной части алоказии проводили согласно общепринятым методикам химического анализа лекарственных растений [19, 20]. С помощью качественных химических реакций установлено наличие алкалоидов, флавоноидов и кумаринов, не обнаружены дубильные вещества, сапонины, сердечные гликозиды, антраценпроизводные, флороглюцины.

Для дальнейшего изучения проводили выделение веществ основного характера (алкалоидов) согласно методике Британского фармацевтического кодекса: к 5 г сырья, с размерами частиц не более 1 мм, добавляли 200 мл смеси (23 мл эфира, 8 мл хлороформа и 2,5 мл 90% этанола). Взбалтывали, оставляли стоять 10 мин., затем добавляли 6 мл 10% раствора аммиака и взбалтывали периодически в течение 3 ч. На следующий день прибавляли 10 мл воды и взбалтывали 10–15 мин. 100 мл смеси фильтровали в делительную воронку.

Фильтрат промывали 5 мл смеси растворителей (диэтиловый эфир – хлороформ – 90% этанол). Алкалоиды извлекали 0,5 н раствором H2SO4 порциями по 20, 15, 10 и 10 мл. Хлороформные извлечения фильтровали через бумажный фильтр в высушенную до постоянной массы колбу, хлороформ отгоняли. К остатку прибавляли 5 мл этилового спирта и снова отгоняли досуха, остаток сушили до постоянной массы при температуре не более 60 °С. С целью количественного определения суммы алкалоидов остаток взвешивали.

В последующих исследованиях остаток растворяли в 5 мл 96% этилового спирта.

Для изучения алкалоидов методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) использовали пластинки Sorbfil (1010) и системы растворителей, представленных в таблице.

–  –  –

Хроматографирование проводили восходящим методом. После этого пластинки высушивали на воздухе и просматривали в ультрафиолетовом свете. Вещества на хроматограмме обнаруживали с помощью реактива Драгендорфа. Положительные результаты получены при использовании систем 1-бутанол – вода – уксусная кислота (БУВ) (5 : 4 : 1) и ацетон – 25% аммиак (10 : 1). В данных системах обнаружен один алкалоид с Rf = 0,34 (БУВ) и Rf = 0,43 (ацетон – 25% аммиак). С целью идентификации алкалоида использовали спектрофотометрическое определение. Для этого пятно алкалоида на хроматограмме элюировали 5 мл 96% этанола и снимали спектр на приборе СФ-26 в области 220–400 нм, применяя в качестве раствора сравнения 96% этанол. Вещество основного характера имеет один максимум при = 250 нм (рис. 1). В аналогичных условиях при = 250 нм определяется хинин гидрохлорид [21], а при = 249 нм – алкалоид аймалин [22]. Можно предположить, что выделенный алкалоид является близким по строению к данным алкалоидам и имеет в структуре изохинолиновое кольцо.

Суммарное содержание веществ алкалоидного характера в пересчете на воздушно-сухое сырье, определенное по методике Британского фармацевтического кодекса, составило (%): 0,049±0,003 (Павловск), 0,053±0,003 (Барнаул), 0,043±0,002 (Белокуриха). Из приведенных данных можно заключить, что количественное различие незначимо и находится в пределах погрешности метода определения.

Выделение флавоноидов проводили, добавляя к 1 г измельченного сырья, просеянного через сито с отверстиями диаметром 1 мм, 10 мл 70% этанола. Нагревали на водяной бане в колбе с обратным холодильником 30 мин., охлаждали на воздухе, фильтровали через бумажный фильтр и упаривали до половины объема на водяной бане.

Для идентификации флавоноидов использовали хроматографию на бумаге марки Siltrac в 15, 30 и 60% уксусной кислоте. Хроматограммы высушивали на воздухе, просматривали в УФ- и видимом свете до и после проявления соответствующими реактивами, при этом отмечали контуры пятен, их флуоресценцию и вычисляли величину Rf.

Для проявления пятен использовали пары концентрированного раствора аммиака и 5% спиртовый раствор хлорида алюминия. В качестве метчиков применяли имеющиеся в наличии спиртовые растворы рутина и кверцетина. Значения Rf, полученные с использованием 15% уксусной кислоты в извлечении из надземной части алоказии составляют 0,26 и 0,37. Значение Rf рутина в этих условиях составляет 0,56, а кверцетина – 0,30. Таким образом, хотя полученное значение Rf = 0,26 находится близко к значению Rf для кверцетина, нельзя с уверенностью утверждать, что один из флавоноидов – кверцетин.

Для получения более достоверных результатов по идентификации флавоноидов применяли метод ВЭЖХ на милихроме А-02. Использовали градиентный режим (полярность растворителя постепенно увеличивается) элюирования. Элюент А – ацетонитрил и 0,01 М KH2PO4 (5 : 95) с рН = 2,5. Элюент В – 100% ацетонитрил, концентрация которого в смеси элюентов увеличивается от 0 до 60% на 1000 мкл подвижной фазы.

Дальнейшее элюирование шло с использованием 60% ацетонитрила. Длина волны детектирования – 360 нм.

В качестве стандартов использовали кверцетин, ликурозид, гиперозид, ликвиритин, рутин, апигенин. Время удерживания веществ флавоноидной природы в исследуемом образце – 8,5; 8,9 и 9,8 мин. На рисунках 2, 3 приведены ВЭЖХ-хроматограммы стандартов и исследуемого образца. Таким образом, можно заключить, что в алоказии содержится гиперозид и в меньших количествах – ликурозид и кверцетин.

–  –  –

Выводы

1. Установлено наличие биологически активных веществ в растении алоказия – алкалоидов, флавоноидов и кумаринов. Показано отсутствие дубильных веществ, сапонинов, сердечных гликозидов, антраценпроизводных, флюроглюцинов.

2. Хроматографическим методом со спектрофотометрическим окончанием показано наличие в алоказии алкалоида, близкого по строению к алкалоидам хинину и аймалину, т.е. имеющего в структуре изохинолиновое кольцо.

3. Впервые установлено наличие в алоказии флавоноидов – гиперозида, ликурозида и кверцетина.

Список литературы

1. Сааков С.Г. Оранжерейные и комнатные растения и уход за ними. Л., 1983. С. 134.

2. Тюкавина Н.А., Руленко И.А., Колесник Ю.А. Природные флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки // Вопросы питания. 1996. №2. С. 33–38.

3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Харьков, 1997. Т. 2. С. 462.

4. Sims D.A., Pearcy R.W. Photosynthetic characteristics of tropical forest understorey herb, Alocasia macrorrhiza, and a related crop species, Colocasia esculenta grown in contrasting light environments // Oecologia 1989. V. 79. P. 53–59.

5. Chow W.S., Qian L., Goodchild D.J., Anderson J.M. Photosynthetic acclimation of Alocasia macrorrhiza (L.) G.

Don to growth irradiance: structure, function and composition of chloroplasts // Australian Journal of plant Physiology. 1988. V. 15. P. 107–122.

6. Sims D.A., Pearcy R.W. Photosynthetic and respiration in Alocasia macrorrhiza following transfers to higt and low light // Oecologia. 1991. V. 86. P. 447–453.

7. Mulkey S.S., Pearcy R.W. Interactions between acclimation and photoinhibition and photosynthesis of a tropical forest understory herb, Alocasia macrorrhiza, during simulated canopy gap formation // Funct Ecol. 1992. V. 6.

P. 719–729.

8. Sims D.A., Pearcy R.W. Response of leaf anatomy and photosynthetic capacity in Alocasia macrorrhiza (Araceae) to a transfer from low to high // Am. J. Bot. 1992. V. 79. P. 449–455.

9. Sims D.A., Pearcy R.W. Scaling sun and shade photosynthetic acclimation of Alocasia macrorrhiza to whole-plant performance – I. Carbon balance and allocation at different daily photon flux densities // Plant, Cell and Environment.

1994. V. 17. P. 881–887.

10. Argall M.E., Bradbary J.H., Shaw D.C. Amino-acid sequence of a trypsin/chymotrypsin inhibitor from giant taro (Alocasia macrorrhiza) // Biochim Biophys Acta. 1994. V. 1204. P. 189–194.

11. Wu Y., Llewellyn D., Mathews A., Dennis E.S. Adaptation of Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae) to a proteinase inhibitor expressed in transgenic tobacco // Molecular Breeding. 1997. V. 3. P. 371–380.

12. Lebot V. Biomolecular evidence for plant domestication in Sahul // Genetic Resources and Crop Evolution. 1999.

V. 46. №6. P. 619–628.

13. Rakba N., Melhaoui A., Rissel M., Morel I., Loyer P., Lescoat G. Irniine, a pyrrolidine alkaloid, isolated from Arisarum vulgare can induce apoptosis and/or necrosis in rat hepatocyte cultures // Toxicon, 2000. V. 38. №10.

P. 1389–1402.

14. Allen M.T., Pearcy R.W. Stomatal behavior and photosynthetic performance under dynamic light regimes in a seasonally dry tropical rain forest // Oecologia. 2000. V. 122. V. 4. P. 470–475.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ … 107

15. Гортинский Г.Б., Яковлев Г.П. Целебные растения в комнате. М., 1993. С. 158–160.

16. Корепанов С. В. Растения в профилактике и лечении рака. Новосибирск, 1998. С. 47–48.

17. Jones D.A. Why are so many food plants cyanogenic? // Phytochemistry. 1998. V. 47. P. 155–162.

18. Правила сбора и сушки лекарственных растений. М., 1985. 321 с.

19. Кузнецова М. А. Лекарственное растительное сырье и препараты. М., 1987. 190 с.

20. Гринкевич Н.И., Софронич Л.Н. Химический анализ лекарственных растений. М., 1983. 176 с.

21. Гетероциклические соединения природного и синтетического происхождения: Метод. указания к практическим занятиям студентов по фармацевтической химии для студентов 4 курса. Барнаул, 1994. Ч. 2. C. 6.

22. Николаева Л.А., Астахова Т.В., Шимолина Л.Л. Спектрофотометрический метод количественного определения аймалина // Исследования по изысканию лекарственных средств природного происхождения. Л.,

1981. C. 267.

Поступило в редакцию 5 февраля 2003 г.

–  –  –



Похожие работы:

«РОССИЙСКАЯ СИСТЕМА СПУТНИКОВОГО МОНИТОРИНГА ЛЕСНЫХ ПОЖАРОВ Д.В. Ершов*, Г.Н. Коровин*, Е.А. Лупян**, А.А. Мазуров**, С.А. Тащилин*** * Центр по проблемам экологии и продуктивности лесов РАН. E-mail: korovin@cepl.rssi.ru ** Институт космических исследований РАН. E-mail: info@d902.i...»

«Программа вступительного испытания в аспирантуру по специальности 03.02.06 "Ихтиология" по биологическим наукам 1.ОБЩАЯ ИХТИОЛОГИЯ 1.1. Ихтиология как наука – ее цели, задачи, методология и связь с другими на...»

«Максимович Н. Г. Воздействие испытаний твердотопливных ракетных двигателей на геологическую среду // Геоэкология. Инженерная геология. Гидрогеология. Геокриология, 2007.N5. – С.404-412. ГЕОЭКОЛОГИЯ. ИНЖЕНЕРНАЯ ГЕОЛОГИЯ. ГИДРОГЕОЛОГИЯ. ГЕОКРИОЛОГИЯ, 2007, № 5, с....»

«Министерство образования и науки Республики Бурятия Закаменское районное управление образования Муниципальное бюджетное общеобразовательное учреждение "Холтосонская средняя общеобразовательная школа" Районная научно-практическая конференция учащихся нач...»

«РЕ П О ЗИ ТО РИ Й БГ П У Коллектив авторов – профессорско-преподавательский состав кафедры "Основы медицинских знаний" БГПУ, тел. 327-84-76 СЫТЫЙ Владимир Петрович – доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой КОМЯК Ядвига Францевн...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ БИОЛОГО-ПОЧВЕННЫЙ ИНСТИТУТ ДАЛЬНЕВОСТОЧНОГО ОТДЕЛЕНИЯ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК МИНИСТЕРСТВО ПРИРОДНЫХ РЕСУРСОВ И ЭКОЛОГИИ РФ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "СИХОТЭ-АЛИНСКИЙ ГОСУ...»

«Введение в экологию Экология как наука, её разделы и место в системе знаний о природе. Исторический очерк развития экологии (труды Аристотеля, Теофраста, Альберта Великого, Палласа, Ламарка, Дарвина, Гумбольдта, Рулье, Геккеля, Мёбиуса, Докуча...»

«Бюджетное образовательное учреждение Омской области дополнительного образования детей "Омская областная станция юных натуралистов" Переселение белок с постоянных мест обитания в парки гор...»

«Министерство здравоохранения Российской Федерации Международная общественная организация "Евро-Азиатское Общество по Инфекционным Болезням" Федеральное медико-биологическое агентство Федеральное государственное бюджетное учреждение "Нау...»








 
2017 www.lib.knigi-x.ru - «Бесплатная электронная библиотека - электронные материалы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.